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Impressum
Der Effekt von Lipid-vermitteltem Gentransfer des sauren Fibroblasten-Wachstumsfaktors (aFGF) auf die Proliferation humaner kornealer Endothelzellen (HCEC) in vitro.
1Dannowski H., 2Bednarz J., 3Reszka R., 2Engelmann K., 1Pleyer U.
1Universitäts-Augenklinik Charité, Campus Virchow-Klinikum, Humboldt- Universität zu Berlin, 2Universitäts-Augenklinik Hamburg-Eppendorf, 3Max- Delbrück-Zentrum für Molekulare Medizin, Berlin-Buch
Einleitung: Das Ziel dieser Arbeit war die Untersuchung der Effekte von aFGF auf die Proliferation humaner kornealer Endothelzellen in vitro nach Lipid-vermitteltem Gentransfer und Stimulation der Zellen mit exogenem aFGF.
Methoden: Eine von Bednarz et al., 2000 beschriebene Zellinie wurde kultiviert und mit einem für aFGF kodierenden Plasmid transfiziert. Dazu wurden verschiedene Transfektionsreagenzien genutzt (DAC30, Lipofectin, DMRIE, Fugene, Effectene). Das optimale Lipid:DNA-Verhältnis wurde mittels ß-gal Gentransfer ermittelt. In 24-Lochplatten wurden 30 000 Zellen/Loch ausgesät und 4 und 7 Tage nach Transfektion gezählt. Als Kontrollen dienten Zellen kultiviert unter Standardbedingungen und Zellen stimuliert mit verschiedenen Konzentrationen von exogenem aFGF.
Ergebnisse: Wir ermittelten bei den verschiedenen Transfektionsreagenzien erhebliche Unterschiede der Gentransfer-Effizienzen. DAC30 transfizierte nur 1% der Zellen, die anderen Vektoren 10-30%. Trotzdem wurde die Proliferation der HCEC von allen aFGF übertragenden Vektoren signifikant auf ca. 150% gesteigert. Dies entspricht einer Konzentration von 10ng exogenem aFGF.
Diskussion: Der Gentransfer stellt eine vielversprechende Anwendung zur Beeinflussung kornealer Endothelzellen dar. HCEC steigern nach Gentransfer von aFGF ihre Proliferation auf ca. 150%. Die höchste Proliferationsrate war unabhängig von der Gentransfer-Effizienz und vergleichbar mit 10ng exogenem aFGF. Dies zeigt, daß bereits geringe Transfektionsraten für eine stimulierende Proteinkonzentration ausreichen. Unterstützt durch DFG (Pl 150/10-1, Re 93/7-1)