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Impressum
Der neurotrophe Wachstumsfaktor Artemin stimuliert corneale Proliferation, Migration und Wundheilung
Ebner S., You L., Kruse F. E.
Augenklinik der Universität Heidelberg, INF 400, D-69120 Heidelberg
Neurotrophine spielen eine wichtige Rolle bei Migration und Wundheilung im Hornhautepithel. Zur Aufklärung weiterer Mechanismen haben wir untersucht, inwieweit Artemin, ein neurotropher Wachstumsfaktor, der zur GDNF Familie gehört, die korneale Wundheilung und die Signaltransduktion in Hornhautepithelzellen moduliert.
Methode: Die Experimente wurden sowohl an Hornhautepithelzellen von Mensch und Kaninchen, als auch an SV-40 transformierten Zellen durchgeführt. Proliferation wurde mittels eines Einzelzell Proliferationsassays quantifiziert, während die Migration in einer modifizierten Boyden Kammer untersucht wurde. In-vitro Wundheilung wurde mittels Bilddokumentation von Wundkratzern evaluiert. Die Map- Kinase Signaltranduktion wurde anhand spezifischer Antikörper und Western Blot analysiert.
Ergebnisse: Die Anzahl der Kolonien /60 mm Schale war in Anwesenheit von 250 ng Artemin signifikant höher als in Kontrolle (80.5 ± 37.9 vs 36.7 ± 17.6; p < 0.001). Die Gesamtzahl der Zellen/Schale war in Gegenwart von Artemin signifikant erhöht (489.25 ± 278.28 vs 218.25 ± 97.85 Kontrolle; p<0.001) Die klonale Proliferation (Zellzahl/Kolonie) war nicht erhöht (5.78 ± 0.65 vs 5.55 ± 0.65 Kontrolle). Die Migration durch 8 µm Filter wurde durch Artemin signifikant gesteigert (59.9 ± 10.5 vs 4.3 ± 8.07; p<0.01). Auch die Wundheilung wurde durch Artemin signifikant stimuliert (38.6 ± 5.64 vs 20.94 ± 4.54; p<0.01). Western blot Analyse zeigte, daß die Phosphorylierung von Erk, Raf, MEK und Elk durch Artemin induziert wird.
Diskussion: Unsere Ergebnisse stützen die Theorie, daß Neurotrophine wie z.B. Nervenwachstumsfaktoren oder Gliazell-Faktoren für Regulation und Wundheilung im Hornhautepithel von Bedeutung sind. DFG (Kr 993/12-1)