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Impressum
Wichtige Regulatoren der Apoptose in humanen Tenon Fibroblasten
Esser J. M., Welsandt G., Luther T., Jordan J. F., Esser P., Krieglstein G. K.
Universitätsaugenklinik Köln, Josef Stelzmann Str. 9, 50931 Köln
Hintergrund: Als Apoptose bezeichnet man einen energieabhängigen, programmierten Zelltod, der ohne entzündliche Reaktionen abläuft. Ziel der vorliegenden Arbeit, war der Nachweis von wichtigen Regulatoren innerhalb der komplexen Reaktionskaskade der Apoptose in humanen Tenon Fibroblasten, denen eine große Rolle in der Vernarbungstendenz nach Glaukomchirurgie zugeschrieben wird. Hierzu gehören die Proteine p53, Bcl-2 und Bax. P53 induziert Apoptose durch Änderung des Gleichgewichtes von Bax und Bcl-2. Zusätzlich untersuchten wir den Einfluß topischer Glaukommedikamente (Latanoprost, Timolol) auf diese Proteine.
Methodik: Die für RT-PCR benötigte RNA wurde aus humanen Tenon- Fibroblasten der Passage P2 mittels Guanidium/Phenol-Extraktion gewonnen. Der Nachweis von p53, Bcl-2 und Bax wurde durch RT-PCR unter Anwendung spezifischer PCR Primer erbracht. Der Nachweis auf Proteinebene wurde durch Western-Blot und Durchflußzytometrie erbracht. Zusätzliche, mit Latanoprost und Timolol behandelte Zellen wurden auf Änderung der Proteinexpression mittels Durchflußzytometrie untersucht.
Resultate: RT-PCR: p53, Bcl-2 und Bax konnten bei den gewählten Primer Kombinationen in den P2 Zellen durch spezifische Banden nachgewiesen werden. Western-Blot: Bei unbehandelten Zellen konnte keines der untersuchten Proteine dargestellt werden. In Tenon-Fibroblasten nach Behandlung mit Amphotericin konnte p53 mit einer starken Bande dargestellt werden. Bcl-2 und Bax konnten nicht nachgewiesen werden. Durchflußzytometrie: Alle Proteine konnten dargestellt werden. Mit Timolol oder Latanoprost behandelte Zellen zeigten eine deutlich gesteigerte Expression.
Diskussion: p53, Bcl-2 und Bax sind wichtige Regulatoren der Apoptose. Durch den Nachweis dieser Proteine in humanen Tenon Fibroblasten ergeben sich neue Strategien für zukünftige Studien der antiproliferativen, proapoptotischen Therapie nach Glaukomoperationen. Insbesondere die gesteigerte Expression nach Behandlung mit topischen Glaukommedikamenten kann ein Hinweis auf bisher nicht bekannte Einflüsse auf die Vernarbungstendenz nach Glaukomchirurgie darstellen.