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Impressum
Formation von Gap junctions in auf Amnionmembran ex vivo expandierten limbalen Epithelzellen
1Hernandez E., 1Meller D., 2Theiss C., 1Steuhl K.-P.
1Universitäts-Augenklinik Essen, Essen und 2Abteilung für Zytologie, Ruhr- Universität Bochum, Bochum
Hintergrund: Weitere Charakterisierung des Zellphänotypes
von auf Amnionmembran (AM) ex vivo expandierten limbalen Epithelzellen.
Gap junctions stellen typische interzelluläre Kommunikationskanäle
dar, werden jedoch nicht in Vorläuferzellen des basalen Limbusepithels
ausgebildet. In dieser Studie wurde insbesondere die Bildung und Funktion
von Gap junctions in Organzellkulturen des Limbus untersucht.
Methoden: Primäre humane Organzellkulturen des Limbusepithels
(LE) und des peripheren Hornhautepithels (PCE) wurden mit SHEM auf AM
oder konventionell auf Plastik für 3 bis 4 Wochen kultiviert. Die
Formation von Gap junctions wurde mit einem monoklonalen Antikörper
gegen das Gap junction spezifische Protein Connexin 43 (Cx43) analysiert.
Normale Hornhaut wurde als Kontrollgewebe verwendet. Die Funktion der
Gap junctions wurde mittels Mikroinjektion von Lucifer Yellow getestet.
Ergebnisse: Cx43 wird in vivo in den basalen kornealen Epithelzellen
gefunden. Hingegen weisen einzelne Subpopulationen der basalen limbalen
Epithelzellen keine Expression von Cx43. Auf AM kultivierte LE sind nahezu
negativ für Cx43, jedoch zeigen PCE unter den gleichen Kulturbedingungen
Cx43 positive Zellgruppen. Desweiteren läßt sich eine gesteigerte
Cx43 Expression in auf Plastik kultivierten LE feststellen. Auf Plastik
kultivierte LE weisen desweiteren in 65% der mikroinjizierten Zellen eine
Farbstoffausbreitung in benachbarte, kommunizierende Zellen auf, wohingegen
auf AM kultivierte LE nur in 31% der Fälle eine Farbstoffausbreitung
erfolgt.
Schlußfolgerungen: Konventionelle Zellkulturen des Limbusepithels
zeigen einen stärkeren Differenzierungsgrad und eine höhere
Anzahl funktionell wirksamer Kommunikationskanäle. Subpopulationen
der auf AM kultivierten Epithelzellen des Limbus hingegen bilden keine
Gap junctions aus und zeigen somit während der ex vivo Expansion
den Erhalt bestimmter Charakteristika von limbalen Vorläuferzellen.