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Impressum
Charakterisierung eines neuen in-vitro Modells für die altersbedingte Makuladegeneration
1Hillenkamp J., 1Zhang J. J., 2Cunningham J. R., 1Hussain A. A., 1Marshall J.
Depts. of Ophthalmology1 and Pharmacology2, The Rayne Institute, St. Thomas´ Hospital, London, UK
Ziel: Die Untersuchung der Transporteigenschaften eines neuen,
von Dr. Zhang entwickelten, humanen in-vitro Zellkultur-Modells für
die altersbedingte Makuladegeneration (AMD).
Methoden: Primär kultivierte humane retinale Pigmentepithelzellen
(RPE) wurden auf humaner Bruch`scher Membran (BM) gezüchtet. Die
BM wurde zuvor für 4 Wochen in kalziumfreier Salzlösung nach
Hank (HBSS) inkubiert, um sie vollständig von epithelialem und choroidalem
Zellmaterial zu befreien. Als ersten Schritt in der Beschreibung der funktionalen
Eigenschaften des Modells bestimmten wir unter Verwendung modifizierter
Ussing-Messkammern die Diffusion von Taurin über die BM und die Strömungsleitfähigkeit
für Wasser der BM vor und nach Inkubation in HBSS.
Ergebnisse: Frisch isolierte PRE-Zellen auf nackter BM zeigten
typische invivo- Eigenschaften, bildeten tight-junctions und Polarität.
Das Spenderalter der BM lag zwischen 42 bis 94 Jahren. Die Strömungsleitfähigkeit
für Wasser der BM lag zwischen 0.88 und 4.6 m/sec/Pa. Erste Experimente
zeigten keinen statistisch signifikanten Unterschied zwischen der Diffusion
von Taurin oder der Strömungsleitfähigkeit für Wasser vor
und nach Inkubation in HBSS.
Diskussion: Dieses Modell ermöglicht die Untersuchung der
Rolle des RPE und der BM im Transport von Nährstoffen zwischen Choriokapillaris
und Photorezeptoren. Vorläufige Untersuchungen haben gezeigt, dass
sich die funktionellen Eigenschaften der BM dieses Modells und frisch
gewonnener BM nicht unterscheiden. Die Ergebnisse deuten darauf hin, dass
die Messung von Transportvorgängen an diesem Modell in-vivo Transportvorgängen
entspricht. Untersuchungen zum gerichteten Transport über das RPE
und den RPE-BMKomplex werden zur Zeit in Vebindung mit in-vitro-Alterung
des RPE durchgeführt.