Karl M., Valtink M., Bednarz J., Engelmann K.

Universitätsklinikum Hamburg-Eppendorf, Klinik und Poliklinik für Augenheilkunde, Martinistr. 52, 20246 Hamburg

Einleitung: Der Verlust epithelialer Charakteristika und spezifischer Funktionen während der Kultivierung kann zu Mißerfolgen bei der Transplantation von RPEZellen, aber auch anderen Zellen, beitragen. In dieser Studie stellen wir eine Methode zur Bestimmung der Phagozytosekapazität von SV40-transfizierten RPEZellen in Abhängigkeit von den Kulturbedingungen vor.
Methoden: SV40-RPE wurden auf 96-Mikrotiterplatten mit definierter Zellzahl ausgesät. Vor Erreichen der Konfluenz wurden die Kulturen 12h serumfrei und anschließend für 12h mit den Testmedien inkubiert. Getestet wurden die Basalmedien MEM(E), DMEM (low glucose), Medium F99 (Medium 199/Ham´s F12) sowie ein kommerzielles serumfreies Medium. Das serumfreie Medium sowie F99 wurden zusätzlich supplementiert mit FCS (0 - 15%) untersucht. Die Zellen wurden mit porcinen POS (SNAFL®-2 markiert) inkubiert und die Anbindung und Aufnahme der POS nach 4h Inkubation mit einem Cytofluorometer ermittelt.
Ergebnisse: Der etablierte Assay ermöglicht die gleichzeitige Messung von Anbindung und Aufnahme der POS. Die Phagozytose wurde in Abhängigkeit von der POS-Konzentration, Inkubationsdauer, POS-Spezifität (gefärbt vs. ungefärbt), Medienzusammensetzung und Serumsupplementierung charakterisiert. Grundsätzlich ist durch Erhöhung der Serumkonzentration bis zu 10% eine Steigerung der Phagozytoserate meßbar, bei höheren Serumkonzentrationen sinkt die Phagozytoserate wieder. Der Einfluß der Basalmedien zeigt sich vor allem bei Serumsupplementierung: Während im serumfreien Medium bei 10% FCS die höchste Phagozytoserate erzielt werden konnte, wurde eine vergleichbare Phagozytoserate im Medium F99 bereits bei 5% FCS erreicht. Proliferationsfördernde Medien scheinen die Phagozytose nur mäßig zu stimulieren.
Diskussion: Die Korrelation von Zellfunktionen und Zellmorphologie in vitro ist bisher wenig verstanden. Mit der hier vorgestellten Methode kann die Phagozytose als spezifische Funktion von RPE-Zellen in Abhängigkeit von der Kulturmethode bestimmt werden. Unterstützt durch die Werner-Otto Stiftung

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