Luther T. T., Semkova I., Kirchhof B., Schraermeyer U.

Universitäts-Augenklinik Köln, Joseph-Stelzmann-Str. 9, 50931 Köln

Hintergrund: Irispigmentepithelzellen (IPE) und retinale Pigmentepithel-zellen (RPE) haben eine gemeinsame embryologische Herkunft. Ihnen gemeinsam sind verschiedene Funktionen, wie zum Beispiel Phagozytose von Photorezeptoraussensegmenten und Produktion von Wachstumsfaktoren. IPE Zellen wurden bei Patienten AMD schon als RPE-Ersatz transplantiert, jedoch mit limitierten Erfolgsraten. In dieser Studie haben wir die Expression des Reportergens enhanced green fluorescent protein (EGFP) in transduzierten IPE Zellen untersucht, die in den subretinalen Raum von Ratten transplantiert wurden.
Material und Methoden: IPE Zellen von Long-Evans Ratten wurden geerntet und kultiviert. Die Zellen wurden mit 200 multiplicity of infection (MOI) AdFK7 transduziert. Dies ist ein Adenovirusvektor, der EGFP unter der Kontrolle eines menschlichen CMV Promoters exprimiert. 6*105 Zellen in einem Volumen von 0,5 µl wurden subretinal in die Augen von Wistar Ratten injiziert. Die EGFP Expression wurde mittels Scanning Laser Ophthalmoscopy (SLO) und (Stereo-) Fluoreszenzmikroskopie überprüft. Nach 4 Monaten wurden die Augen enukleiert und mittels Licht- und Elektronenmikroskopie untersucht.
Ergebnisse: Die Transduktionsrate von IPE Zellen mit 200 MOI ADFK7 in vitro war 100%. Nach der IPE Transplantation zeigten wiederholte SLO und fluoreszenzmikroskopische Untersuchungen starke EGFP Signale in der Region der transplantierten IPE Zellen. Die Expression war über den Beobachtungszeitraum von 4 Monaten stabil. Nach der Enukleation zeigte sich eine gute Integration der IPE Zellen in die RPE Zellschicht. In den IPE Zellen zeigte sich weiterhin EGFP Transgenexpression. Es gab keine immunologischen Hinweise auf IPE Zellabstoßung.
Schlußfolgerungen: IPE Zellen können effizient und stabil mit adenoviralen Vektoren transduziert werden. Langzeitexpression des Reportergens wurde im subretinalen Raum von Ratten nachgewiesen. Diese Ergebnisse ermutigen zur therapeutischen Anwendung von transduzierten IPE Zellen bei Erkrankungen wie AMD, die durch subretinale Neovaskularisationen kompliziert sind. Die Überlebensrate von Photorezeptoren kann möglicherweise weiter erhöht werden, wenn die IPE Zellen vor der Transplantation mit neurotrophen Faktoren transduziert werden.

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