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Impressum
Funktionelle, immunologische und histochemische Methoden zur Darstellung Laser-induzierter Chorioidaler Neovaskularisationen (CNV) im Vergleich
Peters S., Luther T. T., Jordan J., Schraermeyer U.
Universitäts-Augenklinik Köln, Joseph-Stelzmann-Str. 9, 50931 Köln
Einleitung: CNV spielen eine entscheidende Rolle bei der Pathogenese
der Altersbedingten Makuladegeneration (AMD). Ziel der vorliegenden Arbeit
ist es, am Modell der Ratte verschiedene Detektionsmethoden Laser-induzierter
CNV miteinander zu vergleichen.
Methoden: Long Evans Ratten wurden fokale Laserherde (Argon, blau-grün,
150 mW, 100 ms, 100 µm) zirkulär um die Papille appliziert.
10 Tage postoperativ wurden 3 verschiedene Detektionstechniken für
CNV angewandt: 1) Nach i.v.-Injektion von hochmolekularem Fluoreszein-Isozyanat-Dextran
wurden ‚flat mounts' aus Chorioidea und RPE, sowie aus Chorioidea,
RPE und Retina, im Fluoreszenzmikroskop untersucht. 2) ‚Flat mounts'
aus RPE und Chorioidea wurden mit dem Endothelzellantikörper PECAM-1
immunhistochemisch markiert und fluoreszenzmikroskopisch beurteilt. 3)
In den ‚flat mounts' wurde die Alkalische Phosphatase in Endothelzellen
histochemisch zur lichtmikroskopischen Auswertung dargestellt.
Ergebnis: Zirkulär am Rand der Lasernarben fand man intravasale
Dextranansammlungen (Methode 1) bzw. tubulär zu Gefäßen
angeordnete Endothelzellen an den entsprechenden Stellen (Methode 2, 3).
Im Zentrum der Narben wurde eine diffuse Ansammlung von Dextran (Methode
1) bzw. eine diffuse Anordnung flacher, nicht zu Gefäßen formierter
Endothelzellen gefunden (Methode 2).
Schlußfolgerung: CNV können neben den klassischen Methoden
(Fluoreszenzangiographie, Histologie) durch folgende Techniken verläßlich
dargestellt werden: 1) durch Infusion von hochmolekularem fluoreszeierendem
Dextran, welches den Intravasalraum sowie Leckagen darstellt; 2) durch
immunhistochemische Markierung der proliferierten Endothelzellen mittels
Endothelzellantikörpern und 3) durch histochemische Darstellung der
Alkalischen Phosphatase in Endothelzellen. Die Methoden korrelieren gut,
d.h. man findet in allen Methoden zirkulär am Rand der Laserherde
intakte Neovaskularisationsgefäße sowie zentral in der Narbe
gelegene diffuse Leckagen und flache Endothelzellen, die sich nicht zu
Gefäßen formieren.