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Impressum
Digitale konfokale Laser Scanning Mikroskopie in-vivo der Keratozyten mit einem modifizierten Heidelberg Retina Tomographen (HRT 1)
Stave J., Torens S., Käppel K., Guthoff R.
Augenklinik, Universität Rostock, 18057 Rostock
Hintergrund: Unzureichende Bildqualität und ungleichmäßige
Bildausleuchtung sind die Hauptprobleme bei einer automatischen quantitativen
Bestimmung der Keratozytendichte, wenn konfokale Schlitz- Tandem-Scanning-Mikroskope
mit Halogen- oder Quecksilberdampf-Lampen verwendet werden. Ein hoher
Aufwand ist erforderlich, um den Bildhintergrund zu korrigieren. Ziel
dieser Studie war die Umwandlung des HRT in ein konfokales Laser Scanning
Mikroskop zur Abbildung des vorderen Augenabschnittes.
Material/Methode: Wir entwickelten einen z-Scan-Objektivadapter
für die Frontlinse des HRT zur Fokussierung des Lasers auf die Kornea
zusammen mit einem computer-kontrollierten hydraulichen z-Scan zur Verschiebung
der Fokusebene durch die Kornea. Durch die Verwendung einer programmierbaren
Elektronik für einen externen Schrittmotor am Hydraulikantrieb unter
Einbeziehung interner Funtionen einschließlich der Patienten-Datenbank
ist die Schaffung eines digitalen konfokalen Laser Scanning Mikroskopes
möglich. Für die automatische Auswertung werwenden wir eine
spezielle CHEMOTAXIS® -Software.
Ergebnisse: Erste konfokale Bilder einer gesunden Kornea zeigen
eine gleichmäßige Ausleuchtung des Epithels, des Endothels
sowie der Keratozyten und eine scharfe Tiefenauflösung. Erstmalig
wird durch die Verwendung eines konfokalen Laser Scanning Mikroskopes
die Abbildung der interzelluaren Matrix der Keratozyten möglich,
was bei der Verwendung von konfokalen Lichtmikroskopen unmöglich
ist. Der hydraulische z-Scan gestattet zur Aufnahme von digitalen Bildserien
der Keratozyten eine präzise Bewegung duch die Kornea.
Schlußfolgerung: Die konfokale in-vivo Laser-Scanning-Mikroskopie
erlaubt eine gleichmäßige Bildausleuchtung über das gesamte
Rasterfeld bei hoher Auflösung. Dies ist eine gute Voraussetzung
für eine automatische Bildauswertung zur Bestimmung der Karatozytendichte
der Kornea. Der modifizierte HRT ist eine brauchbare Alternative zur Tandem-Scanning-
Mikroskopie, z.B. vor und nach einer PRK oder LASIK. Ein computergesteuerter
Objektivadapter ist ein praktisches Instrument zur Erweiterung der HRT-Funktionen
ohne Verlust seiner ursprünglichen Funktionen.