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Optische Tomographie des Auges mittels Multiphotonen- angeregter Autofluoreszenz- und SHG-Darstellung
König K., Krauß O., Riemann I.,
Friedrich-Schiller-Universität-Jena, Institut für Anatomie II, Zentrum für Lasermikroskopie (Jena)
Hintergrund: Die hochauflösende Darstellung von Augenstrukturen, im speziellen der Cornea, durch 80 MHz fs-Laserpulse wurde untersucht.
Methode: Die Untersuchungen wurden an Schweine-, Maus- und Rattenaugen an einem modifizierten inversen ZEISS LSM 410 mit einem regelbaren Ti:Sa Laser MaiTai, SpectraPhysics, als äußere Laserquelle und einem speziellen JENLAB Interface, bestehend aus einem Strahlaufweiter, einem steuerbaren Strahlabschwächer, einem Shutter, einer Leistungssteuerung und einem Synchronisator durchgeführt. Durch Scannen mit dem Femtosekunden- Laserstrahl in x-, y- und z- Richtung wurde ein Lumineszenzsignal mit einem schnellen Photomultiplier aufgezeichnet.
Ergebnisse: Optische Einzelschnitte, basierend auf Zweiphotonen- angeregter Autofluoreszenz im sichtbaren Spektralbereich und Second Harmonic Generation im UV- und im blauen Spektralbereich wurden mit Submikrometerauflösung erzeugt. Interessanterweise wurde im Stroma bei einer Anregung mit 750 nm bis 850 nm fs- Laserpulsen bei Lichtintensitäten von GW/cm² ein durch Kollagen erzeugtes starkes SHG-Signal detektiert. Gewebsschichten, Einzelzellen und intrazelluläre fluoreszente Kompartimente konnten deutlich dargestellt werden.
Schlussfolgerungen: Ein neuartiges Verfahren zur hochauflösenden Darstellung von Gewebe wurde basierend auf Multiphotonen- angeregter Autofluoreszenz- und SHG- Darstellung entwickelt.