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Abstract
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Einfluss von Gerinnungszeit und Verdünnung auf die epitheliotrophe Potenz von Serum- Augentropfen
Liu L., Harloff S., Herminghaus P., Hartwig D., Wedel T., Geerling G.
Klinik für Augenheilkunde, Medizinische Universität zu Lübeck
Hintergrund: Mehrere Studien zur Behandlung von Augenoberflächenerkrankungen mit Serum-Augentropfen zeigen je nach verwendetem Präparationsprotokoll eine unterschiedliche Effektivität. Wir konnten bereits nachweisen, dass die Konzentration von Wachstumsfaktoren und die epitheliotrophe Potenz von autologem Serum abhängig ist von der verwendeten Zentrifugationskraft. Aber auch andere Herstellungsparameter wie Gerinnungszeit und Verdünnung und könnten die Zusammensetzung des Blutproduktes bestimmen. Deshalb haben wir die Effekte von Serum gesunder Spender, präpariert zu verschiedenen Gerinnungszeitpunkten und verdünnt mit 2 unterschiedlichen Diluentien, in einem humanen Hornhautepithel-Zellkulturmodell untersucht.
Methode: Vollblut von 10 gesunden Spendern wurde nach 20, 60 und 120 Minuten verschiedener Gerinnungsdauer unter standardisierten Bedingungen zentrifugiert und mit BSS oder 0,9% NaCl verdünnt. In diesen Präparaten wurden EGF, FGF, TGF-b1, HGF, PDGF-AB, Fibronektin sowie Vitamin A und E mittels handelsüblicher ELISA- bzw. HPLC-Technik quantifiziert. SV-40 immortalisierte humane korneale Keratinozyten wurden in 96-Lochplatten bei 37°C, 5% CO2 mit Hilfe eines vollständig definierten Kulturmediums inkubiert. Bei 30% Konfluenz wurde das Kulturmedium gegen ein Blutpräparat ausgetauscht. Die P